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人结肠癌细胞株冻存的原则是要逐步缓慢降温

原载自:[行情动态]  2018-12-12  浏览次数:338

  部分细胞在运输过程中,人结肠癌细胞株由于不断震荡及环境不适,可能导致细胞破碎死亡,从而使培养基中漂浮很多细胞碎片及颗粒状物质。这种情况下,平衡后,贴壁细胞用PBS洗两遍再加新的培养基培养或者传代至新瓶中培养即可;悬浮细胞可以离心(1000rpm,3min)收集细胞,并用PBS重悬后再离心一次,再用新的培养基重悬并接种细胞。
  人结肠癌细胞株冻存的原则是要逐步缓慢降温,以避免细胞内部形成冰晶对细胞造成伤害。
  1) 贴壁细胞经消化、离心收集,悬浮细胞经离心收集;
  2) 大约106个细胞加入1ml冻存液(细胞培养液和10%DMSO),用吸管吹打,使细胞分散成单细胞悬液;
  3) 加入到冻存管中。如用1.8ml的冻存管,每管zui好不要加入超过1.5ml的细胞悬液;
  4) 在冻存管上标明细胞名称及冻存日期;
  5) 用厚布或卫生纸包裹冻存管,置于4℃半小时,然后置于-20℃两小时,再置于-40℃两小时,然后置于液氮上方置夜;第二天将细胞置于液氮中;如果仅想提取细胞内的东西可以直接放在-20度的冰箱中。
  6) 记下冻存管存放的位置,作好冻存记录。
  人结肠癌细胞株注意事项:
  1、观察细胞在低倍镜(4或5X物镜)下进行,否则不能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X或20X物镜下。
  2、瓶中运输培养基不能重复再用,请换用加双抗的新培养基,细胞冻存后,培养基中可不加任何抗生素。
  3、有些细胞贴壁不牢,如发现贴壁细胞有脱落,可离心吹打后接种到新瓶内。
  4、收到细胞后,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请及时与我们。
  人结肠癌细胞株是一种成团、贴壁生长的细胞,如果状态好的情况下,生长非常快,细胞形态是不太规则的三角形.在低浓度时,此细胞长梭型(不好描述),高浓度时长成一张地毯,后者才是状态好的。

 

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